Что такое Манту? Противопоказания к проведению пробы, проверка результатов

Временные и абсолютные противопоказания к вакцинации

Туберкулиновая проба – полностью безопасная процедура для здоровых детей. Наличие соматической патологии не является противопоказанием к проведению пробы Манту.

Обратите внимание! Результаты профилактического теста могут быть искажены недавно перенесённой инфекционной болезнью, другой прививкой, хроническим заболеванием.

Реакция Манту характеризуется наличием 2 категорий противопоказаний.

Абсолютные, при которых запрещено проводить пробу. При игнорировании запрета Манту приводит к необратимым последствиям. Обязанность врача – изучить карту ребёнка перед процедурой.

Временные, наличие которых запрещает введение вакцины в момент их актуальности. По прошествии определённого временного этапа пробу можно проводить. Специалист должен оценить состояние здоровья ребёнка до проведения манипуляции.

При наличии сомнений, рекомендуется сделать пробное исследование.


Туберкулиновая проба – полностью безопасная процедура для здоровых детей. Наличие соматической патологии не является противопоказанием к проведению пробы Манту.

Относительные противопоказания

Проба Манту: результаты и интерпретация

Противопоказания к проведению пробы Манту делятся на две группы: относительные и абсолютные. При относительных ограничениях проведение пробы возможно после их устранения. Детям с абсолютными противопоказаниями проводить реакцию с бактериальным белком запрещено в любом случае.

К относительным противопоказаниям относят следующие состояния:

  • кожные высыпания любого происхождения;
  • острые инфекционные болезни или обострения хронических вариантов их течения;
  • повышение температуры тела;
  • у детей с аллергией проба откладывается до устранения ее симптомов.

К противопоказаниям относят недавнюю вакцинацию. Пробу Манту не сочетают с прививками, так как это может привести к ложноположительным результатам исследования. Если проба Манту запланирована на один период с профилактическими прививками, то в первую очередь ставят пробу, а после оценки ее результата вводят необходимую вакцину.

  • дерматиты инфекционного и аллергического характера с постоянным течением;
  • ревматизм и другие аутоиммунные патологии;
  • бронхиальная астма;
  • эпилепсия;
  • шизофрения;
  • прогрессирующие неврологические заболевания.

Проба манту: оценка результата

Пробу Манту оценивают через 72 часа после ее проведения путем измерения размера папулы (инфильтрата) в миллиметрах. Используют только прозрачную линейку с миллиметровыми делениями, регистрируют поперечный размер инфильтрата. При отсутствии папулы регистрируют гиперемию (покраснение).

Но более тревожны следующие ситуации: когда реакция Манту нарастает более, чем на 6 мм или рядом появляются пузырьки, или увеличиваются лимфоузлы, или появляется красная дорожка от пробы к локтю – все это признаки так называемого виража туберкулиновых проб, то есть инфицирования возбудителем туберкулеза. Во всех этих ситуациях ребенка обязательно направляют на консультацию к фтизиатру.

Туберкулиновая проба Манту

Туберкулиновая проба Манту, в просторечье “пуговка” – это специфический диагностический тест (не путать с прививкой!), применяемый при массовом обследовании населения на туберкулез.

Для проведения туберкулиновых проб используют туберкулин.

ЧТО ТАКОЕ ТУБЕРКУЛИН?

Туберкулин по своему составу является сложным соединением. Он не содержит живых или убитых микобактерий туберкулеза, а только продукты их жизнедеятельности, элементы микробной клетки и часть среды, на которой росли микобактерии туберкулеза.

В России с 1975 г. для массового обследования населения на туберкулез используют единую внутрикожную туберкулиновую пробу Манту с 2 туберкулиновыми единицами (2ТЕ) очищенного туберкулина в стандартном разведении. Этот туберкулин соответствует основным требованиям, предъявляемым к туберкулинам: является очищенным от белков, что повышает его специфичность, и стандартизованным к международным стандартам, что свидетельствует о его достаточной активности.

На введение туберкулина возникает ответная аллергическая реакция (положительная туберкулиновая проба) у привитых против туберкулеза (поствакцинальная аллергия) и у инфицированных микобактериями туберкулеза (инфекционная аллергия). В обоих случаях в организме обследуемого находятся туберкулезные палочки. Только в первом случае они внесены с вакциной BCG и поддерживают иммунитет к туберкулезу, а в другом попали в организм из окружающей среды и являются вирулентными, т.е. в определенных условиях могут вызвать заболевание.

Существует ряд критерием, по которым можно различить поствакцинальную

и инфекционную аллергию. Помочь Вам правильно оценить ситуацию может педиатр. В более сложных случаях необходима консультация фтизиатра.

Запомните! Лица, свободные от туберкулезной инфекции, не дают положительного ответа на туберкулиновую пробу, даже при наличии у них аллергической настроенности или аллергических заболеваний. Именно поэтому туберкулинодиагностика является специфическим диагностическим тестом.

КАК ЧАСТО МОЖНО ПРОВОДИТЬ ТУБЕРКУЛИНОДИАГНОСТИКУ?

В России массовая туберкулинодиагностика проводится ежегодно – не реже 1 раза в год.

Два раза в год проводят туберкулиновую пробу:

Ø Детям, не вакцинированным против туберкулеза, независимо от их возраста

Ø Детям, находящимся в контакте с больным туберкулезом

Ø Детям из групп риска по результатам туберкулинодиагностики

Ø Детям из групп медико-биологического риска: больным сахарным диабетом, язвенной болезнью, болезнями крови, системными заболеваниями, получающим длительно (более 1 месяца) кортикостероидную терапию, ВИЧ-инфицированным, детям с хроническими неспецифическими заболеваниями

Ø Детям из социальных групп риска

Именно эти дети имеют наибольший риск заболевания туберкулезом.

Возможно повторное проведение пробы Манту в течение календарного года тем детям и подросткам декретированных возрастов (7 и 14 лет), у которых реакция отрицательная при отборе на ревакцинацию против туберкулеза ( RBCG ).

Туберкулиновые пробы с диагностической целью проводят:

Ø при наличии у ребенка симптомов, подозрительных на туберкулез

Ø с целью уточнения характера туберкулиновой аллергии (поствакцинальная или инфекционная аллергия)

Диагностические туберкулиновые пробы проводят независимо от давности постановки предыдущей пробы.

ЦЕЛЬ ПРОВЕДЕНИЯ ТУБЕРКУЛИНОДИАГНОСТИКИ

Ø Выявление больных туберкулезом

Ø Выявление лиц, инфицированных микобактериями туберкулеза

Ø Отбор детей для ревакцинации против туберкулеза.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ МАССОВОЙ ТУБЕРКУЛИНОДИАГНОСТИКИ

Относительные противопоказания для проведения пробы Манту следующие:

Ø Острые и хронические инфекционные, кожные и соматические заболевания в стадии обострения

Ø Аллергические заболевания в острой и подострой фазе

Ø Карантин по детским инфекциям

Необходимо воздержаться от проведения туберкулиновой пробы при подозрении на наличие индивидуальной непереносимости туберкулина до консультации фтизиатра.

Перед проведением пробы Манту ребенок должен быть осмотрен врачом с целью выявления противопоказаний.

Пробу Манту можно проводить:

Ø Сразу после снятия карантина по детским инфекциям

Ø Через 2-4 недели после перенесенного острого или обострения хронического заболевания

Ø Через 4 недели после проведения профилактических прививок

Для проведения туберкулиновой пробы с диагностической целью при подозрении на заболевание туберкулезом противопоказаний нет!

ОЦЕНКА ВНУТРИКОЖНОЙ ПРОБЫ МАНТУ С 2 ТЕ ППД-Л

Результаты пробы Манту оцениваются через 72 часа путем измерения размера инфильтрата (папулы) в миллиметрах. Измеряется поперечный (по отношению к оси предплечья) размер инфильтрата. При отсутствии инфильтрата измеряется размер гиперемии.

При постановке пробы Манту реакция считается:

Ø Отрицательной при полном отсутствии инфильтрата или гиперемии, при наличии уколочной реакции (0-1 мм).

Ø Сомнительной при инфильтрате размером 2-4 мм или только гиперемии любого размера.

Ø Положительной при наличии инфильтрата размером 5 мм и более.

Ø Гиперергической при наличии инфильтрата 17 мм и более, а также везикуло-некротических реакций независимо от размера инфильтрата с лимфангоитом или без него.

В КАКИХ СЛУЧАЯХ НЕОБХОДИМО ОБРАТИТЬСЯ К ФТИЗАТРУ

Как мы уже говорили, положительная туберкулиновая проба может свидетельствовать и о наличии противотуберкулезного иммунитета (поствакцинальная аллергия) и об инфицированности микобактериями туберкулеза (инфекционная аллергия).

Необходимо обратиться к фтизиатру, если:

Ø положительная туберкулиновая проба появилась впервые после предшествующих отрицательных

Ø наросла на 6 мм и более в течение одного года или постепенно в течение нескольких лет

Ø впервые появился инфильтрат размером 17 мм и более (гиперергическая проба)

В этих случаях необходимо обследование детей в условиях противотуберкулезного диспансера с целью исключения заболевания туберкулезом с последующим проведением превентивного лечения противотуберкулезными препаратами.

В результате взаимодействия туберкулина с противотуберкулезными антителами в инфицированном микобактериями туберкулеза организме помимо местной реакции (в зоне введения препарата), может наблюдаться общая реакция организма на введение туберкулина, проявляющаяся ухудшением общего состояния, головными болями, повышением температуры и т.д.

Если у вашего ребенка после проведения пробы Манту нарушается общее состояние, обязательно обратитесь к фтизиатру, т.к. в этом случае в первую очередь надо думать о заболевании туберкулезом!

Перед проведением пробы Манту ребенок должен быть осмотрен врачом с целью выявления противопоказаний.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

  • Кровь.
  • Слюна.
  • Мокрота.
  • Выделения из половых органов.
  • Смывная жидкость бронхов.
  • Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

  1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
  2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
  3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Как проводится ПЦР на туберкулёз

Особенности забора материала:

  1. Анализ крови обязательно берётся у пациента утром из вены в лаборатории.
  2. Для сдачи мокроты на слизь нужна обязательно из гортани и желательно без большого количества слюны. Её пациент должен сплюнуть в специальный стерильный контейнер, после чего сдать на исследование.
  3. Врачи берут соскоб специальным инструментом со слизистой щеки.
  4. Моча сдаётся в специальном контейнере. Берётся средняя часть утренней порции.

Молекулярно генетическая реакция посредством ПЦР проводится с помощью специального прибора, который называется амплификатор. Для изучения необходимы сегменты ДНК, с которых начинается синтез молекул.

Методика состоит из четырёх этапов:

  1. Изначально собирается необходимый биоматериал для исследования (кровь, мокрота и слюна).
  2. Затем образец прогревается при температуре до 98 градусов и не более двух минут. Таким образом, разрушается первичная форма генетики ДНК и образуются две цепочки.
  3. Далее идёт отжиг или понижение температуры, за счёт чего праймер связывается с нитью ДНК.
  4. Последний этап носит название элонгация. Это синтез молекул, который приводит к конечному результату.

Необходимо провести 25–30 подобных циклов, чтобы получить определённое количество копий ДНК вирусов. По ним и определяются возбудители заболевания.

Информативность и достоверность ПЦР диагностики составляет 100%.

Для получения достоверного результата анализа мочи, пациенту рекомендуется придерживаться следующих правил:

Преимущества и недостатки анализа

Диагностика туберкулеза данным методом – распространенная процедура, она имеет ряд преимуществ:

  • Высокая точность исследования, позволяющая высеять микобактерии в малых количествах.
  • Выявляет заболевание на самых ранних стадиях, еще до возникновения симптоматики.
  • С помощью этого метода получается с первого раза выявить возбудителя.
  • Все исследование (с получением результата) занимает не более 5 часов. При этом посев необходимо ждать несколько недель. Это особенно важно перед проведением оперативных вмешательств, в случае необходимости быстрой диагностики на наличие заболевания.
  • Метод эффективен при диагностике рецидива заболевания.
  • Для исследования применяется жидкий биологический материал.
  • Для проведения диагностики туберкулеза в легких более достоверную диагностическую информацию дает мокрота, при менингите туберкулезного происхождения исследуются участки спинного мозга.
  • Кровь помогает обнаружить местный очаг инфицирования, проверить степень чувствительности возбудителя к антибактериальной терапии, а при помощи этого назначается эффективное и правильное лечение.
  • Может использоваться вместо флюорографического и рентгенологического исследований, которые запрещены для проведения детям младшего возраста. При необходимости можно назначать исследование ПЦР на туберкулез вместо Манту.
  • Главный – это достаточно высокая цена, поскольку для проведения исследования применяется дорогое современное оборудование. За счет этого в основном используется как метод дополнительной диагностики наряду с другими исследованиями.
  • Невозможность провести ПЦР сразу после курса лечения из за остаточных бактерий.
  • В некоторых случаях в результате мутирования бактерий – возбудителей заболевания – результат анализа может быть ложноположительным.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей – менее вредная процедура, чем рентген, при котором ребенок получит лишнюю и не нужную дозу облучения. Тест на туберкулез может вызвать проявление аллергической реакции у ребенка. Бактериологический анализ долго исследуется, результата можно ждать только через месяц. Поэтому при возможности проведения ПЦР ребенку лучше использовать его.

ПЦР в диагностике туберкулеза

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) представляет собой современный и эффективный метод диагностики многих заболеваний, в том числе и туберкулеза. Такая процедура позволяет достаточно быстро определить возбудителей различных заболеваний. В итоге ПЦР на туберкулез помогает пациенту и его лечащему врачу своевременно начать терапию выявленной патологии.

  • Как проводится сама ПЦР-диагностика
  • К кому обратиться за проведением анализа?
  • Кому проводится?
  • Основные минусы
  • кровь,
  • моча,
  • кал,
  • мокрота,
  • соскоб с любых органов,
  • выделения половых органов,
  • спинномозговая жидкость.

Преимущества метода

ПЦР-диагностика туберкулеза завоевала популярность по многим причинам. Она имеет массу достоинств, среди которых:

  1. Точность исследования. При проведении анализа с соблюдением технологии удается выявить бактерии, даже если они присутствуют в малом количестве.
  2. Быстрый результат. Весь процесс от сбора материала до готового заключения занимает около 5 часов. Если сравнить с посевом, его приходится ждать до нескольких недель.
  3. Полная безопасность для человека, в отличие от флюорографии с ее облучением.
  4. Используется любой жидкий биоматериал. Для осуществления ПЦР при туберкулезе легких наиболее точную информацию дает мокрота, при туберкулезном менингите берется образец из спинного мозга. Анализ крови помогает выявить местные очаги инфекции.
  5. Проверяется чувствительность бактерий к антибиотикам. Это позволяет назначить правильное лечение.
  6. Ранняя диагностика. Узнать о наличии заболевания можно до появления ее симптомов.

Кроме положительных моментов есть и недостатки. Главный из них – это цена. Анализ ПЦР не из дешевых, что связано с использованием дорогого оборудования. Еще один минус – необходимость выжидать время для проведения повторного теста после курса лечения от туберкулеза. Иногда результат проверки получается ложноположительным. Такое бывает из-за мутации бактерий.


ПЦР на туберкулез легких не имеет противопоказаний и абсолютно безопасен. Поэтому есть определенные ситуации и заболевания, когда это единственная возможность исследования.

Что такое ПЦР диагностика

Это один из самых современных методов диагностики не только заболеваний, но и обнаружения биологического материала. ПЦР диагностика была изобретена относительно недавно. Около 30 лет назад в 1983 году американский биохимик Кэри Бэнкс Муллис предложил сложную схему восстановления биологического материала микроорганизмов по одному краткому сегменту. Благодаря своему открытию учёный был удостоен наивысшей награды — Нобелевской премии.

Что это такое — ПЦР диагностика инфекций? Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это диагностика выявления вирусных заболеваний, основанная на методах генной инженерии. Она широко применяется в медицинской микробиологии, иммунологии и вирусологии. Метод универсальный и помогает поставить диагноз при малом количестве материала. Выявить инфекцию можно буквально в первые часы заражения ею, задолго до того, как проявятся первые симптомы заболевания.

Суть метода заключается в получении из материала от больного человека не самого возбудителя, а фрагментов генома (частиц ДНК), его биосинтезе с последующим определением к какому классу микроорганизмов принадлежит полученный генетический материал с помощью молекулярно-генетических методов.

Несмотря на то что это сложный процесс, он занимает намного меньше времени, чем многие биологические способы обнаружения возбудителей инфекций. В течение всего нескольких часов с помощью ПЦР удаётся обнаружить микроорганизм. Для этого нет необходимости выделять его из среды (крови, спинномозговой жидкости, мокроты) и долго выращивать на искусственных питательных средах. Достаточно чтобы в исследуемом материале присутствовал небольшой фрагмент нити ДНК возбудителя инфекции.

В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.

Что необходимо для проведения ПЦР?

  1. Праймеры — участки ДНК, с которых и начинается биосинтез или создание.
  2. Нуклеотиды или сложные соединения, которые являются основой молекулы ДНК либо РНК.
  3. Полимеразная цепная реакция невозможна без присутствия полимеразы, которая представляет собой фермент ускоряющий ход ПЦР.

В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.

Что важно знать

Туберкулез – инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией – палочка Коха. Чаще поражаются легкие, но очаги могут быть и в других тканях. Передается респираторно, а также со слюной, кровью, при совместном использовании бытовых приборов и тесном контакте в быту.

Заболевание протекает в двух формах:

  1. Закрытая стадия. Больной при контакте не опасен для окружающих. В мокроте анализы не выявляются признаки возбудителей, ложной будет и ПЦР диагностика на туберкулез. При отсутствии лечения патогенез усугубляется.
  2. Открытая стадия. Палочка Коха присутствует в биологических жидкостях человека, легко диагностируется лабораторными методиками. В таком состоянии человек является опасным для окружающих.

Обратите внимание. Поскольку начало туберкулеза легких протекает латентно, то проводится скрининг. Взрослые люди должны раз в год или два (зависит от региона проживания) проходить флюорографию, которая показывает наличие инфильтрата в тканях. Это дешёвый и быстрый способ диагностики.

На данный момент для выявления опасных микобактерий проводят ряд анализов:

  • методы рентгенографии;
  • КТ или МРТ;
  • туберкулиновые пробы (реакция Манту).

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Преимущества и недостатки метода

В сравнении с другими микробиологическими методами, на выявление микобактерий туберкулеза с помощью ПЦР не требуется длительного времени, результата можно получить в день сдачи анализа.

Также преимуществом является высокая специфичность анализа, что позволяет выявить наличие возбудителя с точностью 90-95% практически в любом биоматериале (кровь, моча, кал, спинномозговая жидкость, мокрота, смыв из бронхов).

Однако существует ряд недостатков метода:

  • довольно высокий процент ложноположительных результатов (до 15%), что связано с выявлением неживых микроорганизмов;
  • в некоторых случаях можно пропустить факт заболевания, так как микобактерия туберкулеза часто подвергается мутациям и ее генетический материал изменяется;
  • низкая эффективность при обследовании людей с иммунодефицитами;
  • высокая стоимость исследования, необходимость наличия дорогостоящего оборудования и реактивов.


Общеклинические анализы помогут более конкретно определить состояние организма. Обязательно проводится общий анализ крови с лейкоцитарной формулой.

Подготовка к процедуре

Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:

  1. Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
  2. Процедура проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
  3. За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
  4. Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
  5. При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедура переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность. Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат. Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.

  1. Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
  2. Процедура проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
  3. За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
  4. Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
  5. При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедура переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Этапы исследования методом ПЦР

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

  1. Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
    • Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
    • Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
    • Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
    • Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
    • Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
    • Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
  2. Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
  3. Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
  4. Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
  5. Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
  6. Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.
  1. Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
    • Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
    • Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
    • Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
    • Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
    • Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
    • Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
  2. Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
  3. Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
  4. Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
  5. Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
  6. Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Mycobacterium tuberculosis, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.

Туберкулез, микобактерии туберкулеза, палочка Коха.

Tuberculosis, Tubercle bacillus, Koch’s bacillus.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, венозную кровь, ликвор, мокроту, плевральную жидкость, первую порцию утренней мочи, эякулят.

Общая информация об исследовании

Туберкулез (от лат. tuberculum – “бугорок”) – инфекционное заболевание человека и животных, передающееся преимущественно воздушно-капельным путем. Риск заразиться повышает подавление иммунитета, вызванное ВИЧ/СПИДом, диабетом, заболеванием почек, трансплантацией органов и применением иммуносупрессоров, беременностью, старением. Кроме того, наиболее подвержены ему те, кто контактирует с больными туберкулезом, а также дети до 5 лет после виража туберкулиновой пробы. К наиболее уязвимым группам населения относят бездомных, заключенных, мигрантов из стран с высокой заболеваемостью туберкулезом, наркопотребителей, а также пожилых людей.

Для данного исследования используется тест-система, основанная на выявлении геномной ДНК возбудителя туберкулеза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). В современной диагностике это один из самых быстрых, универсальных и высокочувствительных методов.

Стандартные способы обнаружения микобактерий туберкулеза базируются на выращивании патогенных микроорганизмов в питательной среде. Сложности связаны с низкой скоростью роста колоний Mycobacterium tuberculosis – необходимо ожидать до 1,5 месяцев после взятия материала.

Высокой чувствительностью и специфичностью обладают молекулярно-биологические методы, основанные на детекции генетического материала микобактерий туберкулеза. Их важнейшим преимуществом является высокая скорость получения результата. Использование ПЦР реал-тайм позволяет выявить возбудитель туберкулеза уже в день получения клинического образца.

Бактериемия (попадание в кровь пациента микобактерий) может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также при развитии генерализованного или внелегочного туберкулеза. Она опасна тем, что иммунный ответ на бактерии вызовет сепсис и септический шок, чреватый смертью. Риск развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у пациентов с ВИЧ на поздних стадиях, у тех, кто прервал противотуберкулезную терапию, а также у не обратившихся вовремя за медицинской помощью при появлении симптомов туберкулеза.

Диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных затруднена из-за иммуносупрессированного состояния организма, что зачастую проявляется в ложноотрицательных результатах туберкулиновых реакций и микробиологических тестов. В связи с этим тестирование на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР реал-тайм имеет большое значение.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики туберкулеза легких (в частности, его генерализованных и внелегочных, связанных с бактериемией, форм), и контроля за его лечением.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на внелегочный туберкулез.
  • При симптомах бактериемии на фоне туберкулезной инфекции: повышенной температуре тела, потливости и пр. (при небольшом количестве бактерий в крови бактериемия может протекать бессимптомно).
  • Если у пациента был длительный контакт с больным туберкулезом.
  • При ненормальной реакции на туберкулиновую пробу у детей.
  • Когда у пациента ВИЧ-инфекция.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • Наличие возбудителя в исследуемом биоматериале. Это обычно встречается при активной форме туберкулеза, требующей лечения. Выявление большого количества микобактерий чаще всего указывает на внелегочную форму туберкулеза либо генерализацию инфекции.
  • Возбудителя туберкулеза не выявлено. Бактериемия отсутствует.

Что может влиять на результат?

Эффективная противотуберкулезная терапия со временем приводит к исчезновению микобактерий в клиническом материале.

  • Для назначения корректной схемы лечения при выявлении у пациента туберкулеза необходимо провести тест на чувствительность микобактерий к противотуберкулезным препаратам.
  • Mycobacterium tuberculosis, антитела
  • Mycobacterium tuberculosis complex, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, фтизиатр, уролог, гинеколог, инфекционист.

Бактериемия (попадание в кровь пациента микобактерий) может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также при развитии генерализованного или внелегочного туберкулеза. Она опасна тем, что иммунный ответ на бактерии вызовет сепсис и септический шок, чреватый смертью. Риск развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у пациентов с ВИЧ на поздних стадиях, у тех, кто прервал противотуберкулезную терапию, а также у не обратившихся вовремя за медицинской помощью при появлении симптомов туберкулеза.

Ссылка на основную публикацию